非洲豬瘟（African swine fever,ASF）是由非洲豬瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）引起豬的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病。臨床上以豬高熱、食欲廢絕、皮膚發(fā)紺、內臟實(shí)質(zhì)、器官出血、呼吸系統和神經(jīng)系統功能紊亂為主要特征。被動(dòng)物衛生組織（OIE）列為必須報告的動(dòng)物疫病，在我倍列為一類(lèi)動(dòng)物疫病。該病病程短，死亡率*，已對發(fā)病家的養豬業(yè)造成災難性打擊。

2018年7月，遼寧省沈陽(yáng)市發(fā)生*非洲豬瘟疫情，截止2019年上半年，全共發(fā)生非洲豬瘟疫情100余起，包括25個(gè)省份（安徽、貴州、河南、黑龍江、湖北、湖南、吉林、江蘇、遼寧、內蒙古、山西、陜西、天津、云南、浙江、重慶、江西、福建、四川、上海、北京、青海、廣東、甘肅、寧夏），非洲豬瘟對我養豬業(yè)的危害日益嚴峻。

ASFV是非洲豬瘟病毒科非洲豬瘟病毒屬的WEI一成員,病毒基因組全長(cháng)170~ 190 kb ,為有囊膜的雙股線(xiàn)狀DNA病毒,病毒粒子大小為175~215 nm,呈正二十面體結構。該病毒可使各種日齡和品種的家豬與野豬感染并發(fā)病,病毒可在多數蜱種中增殖,使蜱成為病毒的貯藏宿主和主要傳播媒介。該病毒早于1921年在非洲東部肯尼亞被發(fā)現,隨后開(kāi)始在撒哈拉以南的非洲東部、中部、南部等地區蔓延。1957 年病毒從非洲的安哥拉傳到歐洲的西班牙,病毒開(kāi)始在歐洲呈零星、持續流行。1971 年病毒從西班牙傳入南美洲的古巴,南美洲和拉丁美洲的多數家陸續暴發(fā)疫情。2007年病毒傳入歐亞接壤的高加索地區,隨后開(kāi)始向俄羅斯南部地區擴散流行，2017年傳播至俄羅斯遠東地區伊爾庫茨克,導致傳入我的風(fēng)險升高。2018年7月末，遼寧省沈陽(yáng)市一養豬戶(hù)飼養的豬陸續發(fā)生不明原因死亡,病死豬剖檢發(fā)現脾臟異常腫大,疑似非洲豬瘟病毒感染,經(jīng)家外來(lái)動(dòng)物疫病研究中心檢測,確診為非洲豬瘟病毒核酸陽(yáng)性,通過(guò)序列分析發(fā)現引起該疫情的非洲豬瘟病毒B646L/p72基因序列與俄羅斯毒株100%匹配,與俄羅斯和東歐目前流行的格魯吉亞毒株( Georgia 2007 )屬于同-進(jìn)化分支,這是我發(fā)現的*非洲豬瘟,目前階段，面對非洲豬瘟還是以防疫銷(xiāo)毀為主。那么問(wèn)題來(lái)了，當豬類(lèi)養殖戶(hù)或者豬肉產(chǎn)品加工企業(yè)應該如何檢測非洲豬瘟？依據哪些家標準來(lái)進(jìn)行檢測呢？

有關(guān)非洲豬瘟的檢測標準主要有：

 GB/T 18648-2002 《非洲豬瘟診斷技術(shù)》 、 

SN/T 1559-2010  《非洲豬瘟檢疫技術(shù)規范》、 

SZDB/Z131-2015《非洲豬瘟病毒抗體檢測阻斷酶聯(lián)免疫吸附法》 、 

T/CVMA 5-2018 《非洲豬瘟病毒實(shí)時(shí)熒光 PCR 檢測方法》 等。

這其中 GB/T 18648-2002 《非洲豬瘟診斷技術(shù)》制定時(shí)，我還尚未發(fā)現非洲豬瘟，所以只介紹了聚合酶鏈式反應試驗(PCR)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)兩種試驗方法。更多具體檢測試驗方法可以依據SN/T 1559-2010  《非洲豬瘟檢疫技術(shù)規范》來(lái)進(jìn)行。其次，有關(guān)非洲豬瘟病毒鑒定檢測的試驗主要病毒紅細胞吸附試驗（HAD）、病毒熒光抗體試驗(FAT)、聚合酶鏈式反應試驗(PCR)、基因組Taqman探針熒光PCR試驗、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、間接熒光抗體試驗(IFAT)、免疫印跡試驗等。

下面對主要的幾種檢測方法做一個(gè)簡(jiǎn)單的介紹

1. 膠體金試紙檢測方法

膠體金試紙檢測方法是以膠體金作為示蹤標志物,利用層忻技術(shù)實(shí)現抗原抗體特異性檢測的一種新型的免疫檢測技術(shù)。該方法具有快速、靈敏、特異等優(yōu)點(diǎn),該方法操作簡(jiǎn)單，無(wú)需儀器設備，直接采血滴加到試紙條上20分鐘即可查看結果，尤其適合臨床的快速診斷,但該方法的敏感性較高,易出現假陽(yáng)性。

2.PCR法

PCR方法操作簡(jiǎn)單、檢測快速,是目前簡(jiǎn)單的分子生物學(xué)檢測技木,但該方法的敏感性有限，且擴增后電泳檢測需要使用溴化乙錠，具有一定的毒性。PCR檢測方法具有很好的實(shí)用性，檢測結果準確率較高，可以有效地應用于A(yíng)SF的診斷以及防控。

3. 熒光定量PCR方法

實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法是將光譜技術(shù)引入到PCR反應中,通過(guò)熒光信號的強弱變化定量測定特異性擴增產(chǎn)物的量,解決了常規PCR方法敏感性低和電泳檢測中溴化乙錠對環(huán)境的污染問(wèn)題。熒光定量PCR方法敏感性高、特異性強,已逐步成為ASFV的臨床診斷、檢疫、食品安全檢驗的重要方法。

4. ELISA方法

     ELISA方法高通量、檢測快速、操作簡(jiǎn)單,是目前常用的免疫學(xué)診斷技術(shù)，可用于豬群中ASFV感染的大規模調查。該方法具有敏感性高、重復性好、特異性強、準確性高等特點(diǎn)。但作為血清學(xué)檢測技術(shù)該方法具有一定的滯后性,無(wú)法對ASFV的早期感染做出診斷。

在我的《家中長(cháng)期動(dòng)物疫病防治規劃( 2012-2020)》中，ASF被列為優(yōu)先防范的13種重大外來(lái)動(dòng)物疫病之一，且我已發(fā)生* ASF疫情,該病但在我廣泛流行,將給我養豬業(yè)及養豬相關(guān)產(chǎn)業(yè)造成巨大沖擊。目前應加強流行病學(xué)調直和主動(dòng)監測排查工作，保持高度警惕,防止該病在我的進(jìn)一步流行。

本文簡(jiǎn)單介紹了ASF各種診斷技術(shù)方法的優(yōu)缺點(diǎn),綜合比較來(lái)看，目前熒光定量PCR法是效果較好，污染較小的檢測方法，廣泛適用于養殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)、畜牧、疾控、食品企業(yè)、檢測機構等領(lǐng)域，是非洲豬瘟防控的優(yōu)選檢測方法。

熒光定量PCR非洲豬瘟檢測 配置方案

選配配件